ARTEMIZINIINI SISU ARTEMISIA AASTA A LÕPETAMISEKS, MIS TULEB TEATAVATE MEETODIDEGA t Soktoeva, G.L. Ryzhov, K.A. Dychko, V.V. Khasanov, SV Zhshzhitzhapova, LD Padnaeedi Burjaat Riiklik Ülikool, st. Smolin, 24a, Ulan-Ude (Venemaa) Tomski Riiklik Ülikool, 36, Lenina Ave., Tomsk (Venemaa) Baikali Loodusjuhtimise Instituut, Vene Teaduste Akadeemia Siberi haru, ul. Sakhyanova, 8, Ulan-Ude (Venemaa)
Käsitletakse Artemisia annua L. Artemisiniini eraldamise küsimusi ja selle kvantitatiivset määramist HPLC-MS meetodil. Artemisiin eraldati mitmesuguste ekstraheerimismeetoditega: leotamine, ultraheli ja subkriitiline CO2 ekstraheerimine. CO2 ja heksanoekstraktide komponendi koostist uuriti GC-MS abil.
Sissejuhatus
Artemisiniin (1) on peroksiidiseskviterpeen [1], mis on väga efektiivne malaariavastane ravim ja tugevamate ühendite, nagu artemeetri, artesuaadi ja mõnede teiste, eelkäija. Artemisiniini ja selle derivaatide tähtsus põhineb selle ühendi väga kiirel toimel selle peamise patogeeni Plazmodium falciparum suhtes, mis põhjustab ka ajuhaigust. Artemisiniini keemiline ja biokeemiline süntees on osutunud väga kalliks ja seetõttu ei ole see praegu peamine artemisiniini tootmise allikas [2].
Malaaria põhjustab mikroorganism - Plasmodium malaria. Inimkehas on 4 tüüpi plasmodium, parasiitid: Plazmodium vivax, P. ovale, P. malariae ja P. falciparum. 20. sajandi keskel, tänu kiniini ja selle derivaatide laialdasele kasutamisele, oli võimalik malaariaga patsientide arvu oluliselt vähendada. Kuid alates 60ndatest aastatest. eelmise sajandi malaaria meenutas taas iseennast. See oli tingitud asjaolust, et Tais ja Lõuna-Ameerikas ilmusid ja levisid muudes piirkondades kiniinile, klorokiinile, meflokiinile ja teistele kinoliinil põhinevatele ravimitele malaaria Plasmodium (P. falciparum) [3, 4]. Uute efektiivsete malaariavastaste ravimite leidmise probleem, mille hulgas pakuti välja artemisiin, on muutunud aktuaalseks. See ainulaadne ühend avastati Hiinas (Hiina nimi on qinghaosu). Teosed algasid 1967. aastal ja neid nimetati „Programm 523” [5]. See on isoleeritud iga-aastase Atemisia annua L. koirohust, mis levitatakse endise NSV Liidu territooriumil, hõlmates Altai, Transbaikalia, Amuri piirkonna, Kasahstani, Kõrgõzstani, Usbekistani ja Türkmenistani piirkondi. Koirohi on Hiinas ja teistes riikides laialdaselt esindatud [6]. A. annua erinevatest osadest isoleeritud artemisiniini üldkogus on umbes 0,01 ja 1,4% kuiva lehe massist [2].
Artemisia annua L. on artemisiniini tootmise peamine tooraine. Maailma Tervishoiuorganisatsioon soovitas 2001. aastal kasutada artemisiniini malaaria tõrje esimese rea ravis, mis tõi kaasa ühe-aastase koirohi all oleva ala suurenemise. Enamasti kasvatatakse koirohi igal aastal Ida-Aasias, peamiselt Hiinas ja Vietnamis (70% maailma varudest), mis on hiljuti Ida- ja Lõuna-Aafrikasse kultuurile sisse viidud (20% maailma varude pindalast), mis annab veerandi maailma tervisevajadustest [7].
Lisaks artemisiniinile hinnatakse A. annua oma eeterliku õli jaoks, millel on iseloomulik magus, rohumaa aroom ja mida kasutatakse parfümeeria- ja kosmeetikatoodetes. Lisaks on õlil antibakteriaalsed omadused ja seda saab kasutada nahahaiguste raviks. Lisaks sesquiterpene laktoonidele, millel on peamine terapeutiline väärtus, sisaldavad selle taime eeterlikud õlid olulist kogust komponente, millel on väärtus, näiteks 1,8-cyneool, artemisia alkohol ja ketoon, borneool jt, uuriti hiljuti ühe-aastase koirohu rasvhapete koostist ja analüüsis ka lipofiilsete ekstraktide füsioloogilist toimet nahale [2].
Seoses Artemisia annua bioloogiliselt aktiivsete ainete rikkaliku ja mitmekesise koosseisuga on iga-aastase koirohi uute kasvupiirkondade otsimine väga oluline. Burjaatia Vabariigis kasvab 46 polünumiliiki [8], kaasa arvatud Artemisia annua L. Arturiiniini sisaldust Poolas, mis on aasta vanune ja kasvab Burjaatias, ei ole varem uuritud. Seetõttu oli selle töö eesmärgiks artemisiniini kvantitatiivne määramine ekstraktides, mis saadi erinevate ekstraheerimismeetoditega.
Eksperimentaalne osa
Uurimuse tooraine valiti õitsemisfaasis 2010. aasta augusti esimesel kümnendil kogutud poolaastase Artemisia annua L. maapinnast.
Artemisiniini ja teiste bioloogiliselt aktiivsete ainete (eeterlik õli) eraldamine viidi läbi erinevate ekstraheerimismeetodite abil: leotamine, ultraheli ekstraheerimine ja subkriitiline CO2 ekstraheerimine. Ekstraheeriti laboratooriumis. Ekstraktantidena kasutati heksaani, etüülatsetaati, etanooli ja CO2. Andmed ja ekstraheerimisparameetrid on toodud tabelis 1. Sade ekstraktid eraldati tsentrifuugimisega OP-8UHL4.2 tsentrifuugis kiirusel 5000 p / min ja seejärel filtriti läbi proovi filtreerimissüsteemi.
Artemisiniini kvantitatiivne määramine määrati HPLC-MS abil, kasutades Finnigan Surveyori kõrgsurvevedelikkromatograafi, mis oli varustatud autosampler Plus autosampleri ja LCnN Advantage MAX (ioonilõksu) Finnigan detektoriga LC Pump Plus pumbaga, ionisatsioonimeetod - elektropihustus. Veerg "Hypersyl Gold" 150 × 4 mm, täidetud silikageeli sorbendiga C18 poogitud faasidega (osakese suurus 5 μm), (toodetud Thermo electronic Corporation, USA). Elueerimine viidi läbi isokraatlikus režiimis (50% (A): 50% (B)), lähtepuhvri (A) koostis oli sipelghappe vesilahus (pH = 3) + 2 ml küllastatud ammooniumatsetaadi lahust, elueerimispuhver (B) - 100% atsetonitriil. Eluendi ruumala voolukiirus on 0,5 ml / min, süstitava proovi (autosampleri) maht on 25 μl. Ioonide registreerimine viidi läbi positiivselt laetud ioonide (Selected Ion Monitoring, SIM) jälgimisrežiimis, mille molekulmass oli 300 (ammoniumiooni NH4 lisamise tõttu artemisiniini molekulile) akna laiusega (299-301) m / z. Kvantitatiivne määramine viidi läbi sisemise standardmeetodi abil, kasutades Sigma standardse standardproovi.
Ekstraheerimise meetodid ja parameetrid
Nr p / p Ekstraheerimismeetod Ekstraktant Ekstraheerimise aeg / ekstraheerimise parameetrid Artemisiniini sisaldus protsentides a.s.s.
1 Etanooli 24 h / tooraine: lahusti suhe (1: 5) 0,040 ± 0,002
2 Maceratsiooni etanool 48 h / tooraine: lahusti suhe (1: 5) 0,038 ± 0,002
3 Heksaani leotamine 24 h / proovi: lahusti (1: 5) suhe 0,039 ± 0,002
4 Ultraheli ekstraheerimine etanool 15 min / toorainete suhe: lahusti (1: 5), helitugevus 50 Hz, T = 25 ° C 0,039 ± 0,002
5 Ultraheli ekstraheerimine etüülatsetaat 15 min / tooraine: lahusti suhe (1: 5), helitugevus 50 Hz, T = 25 ° C 0,022 ± 0,001
6 CO2-ekstraheerimine so2 24 h / voolukiirus 30 l / h, T = 20-22 ° C, P = 6,0-6,2 MPa 0,054 ± 0,003
Lisaks uuriti CO2 ja heksaani ekstraktide lenduvaid komponente kromatograafia-massispektromeetriaga MSD 5973N quadrupole detektoriga Agilent Packard HP 6890 gaasikromatograafil. Me kasutasime 30-meetrist kvartskolonni TR-5 ms, mille sisediameeter oli d = 0,25 mm, kile paksus 0,25 μm. Kromatograafiline eraldamine viidi läbi nii, nagu on kirjeldatud [9]. Ekstraktide komponendid määrati kvalitatiivselt, et võrrelda kogu massispektrit taimset päritolu lenduvate ainete massispektromeetria andmete kromatograafi andmetega. Tkachev, raamatukogud NIST 08 ja Wiley 275. Analüüsi tulemused on esitatud tabelis 2.
CO2 ja heksaani ekstraktide peamised komponendid
Suhteline pindala Ühendused Piigi pindala suhteline
CO2-ekstrakti heksaani ekstrakti ühendid
CO2 ekstrakt Heksaani ekstrakt
Monoterpenoidide pikaahelalised süsivesinikud
Tricüküleen 140181 - trosaan 103969 52288
a-pinene 1155320 - Tricozen-1 1956324 -
Camphene 2021028 - n-pentakosaan 534763 110485
R-pinen 371548 1683858 645634 - - -
n-heptakosaan 279800 132358
3-hoolitsemine
Tsüklilised süsivesinikud
Limonen
Pentatsüklo 576196 -
R-phellandren 587143 - [7.5.0.0 (2.8).0 (5.14) 0.
1,8-tsineool 133599 - (7.11)] tetradekaan
Artemisia ketoon 1413437 - 1,8-dimetüülfenantreen 3765681 1080289
Borneol 170158 707945 - - Flyuoren 3507465 319501
Bornyüülatsetaat
Diterpenoidid
Sesquiterpenoidid
Metüül-3,5-bis (etüülamino) bensoaat 627581 283913
Cariofillen 370714 214560 - -
Karyofilleni oksiid
Germacren D 214913 -
R-Selinene 3053333 328535
a-kadinool 149485 -
Tulemuste arutelu
Nagu näha tabelis 1 esitatud andmetest, oli artemisiniini madalaim saagis (0,022%) ultraheliekstraktsiooniga etüülatsetaadiga. Artemisiniini sisaldus ekstraktides, mis on eraldatud ultraheli ekstraheerimisel ja leotamisel, kasutades erinevaid lahusteid (heksaan, etüülalkohol), ei erine märkimisväärselt 0,038-0,040% tasemest A. p. Et etüülalkoholi koirohi iga-aastaselt 24 ja 48 tunni jooksul nõuda, on artemisiniini sisaldus saadud ekstraktides ligikaudu sama, mis vastavalt 0,040 ja 0,038%. Artemisiniini suurim saagis (0,054%) saadi eelkriitilise CO2-ekstraheerimise käigus. Võrdluseks esitame mõningaid andmeid artemisiniini sisalduse kohta üheaastases koirohus, mis kasvab erinevates piirkondades. Artemisia annua L., mis kasvab erinevates Hiina osades, sisaldab 0,01 kuni 0,22% artemisiniini. Mõned Hiinas ja Vietnamis kasvatatud iga-aastase koirohi hübriidid sisaldavad 1,0–1,5% artemisiniini [10]. Endise NSV Liidu territooriumil kasvanud A. annua artemisiniini sisaldus on järgmine (väärtused on esitatud õhu kuivade toorainete järgi): Gruusia SSR (0,005%), Kõrgõzstani NSV (0,025%), Moldova NSV (0,01-0,02%), Krasnodari territoorium (0,04%), Ukraina SSR (0,005-0,05%), Türkmenistan (0,05% a.s.c) järgi, Kasahstan (0,01-0,05% A.S.S.) [11].
Iga-aastase koirohu ekstraktide koostise uurimisel, mis saadi CO2 ekstraheerimise ja leotamise teel, kui heksaani kasutati ekstraheerimisena, näitas kromatograafia-mass-spektromeetria olulisi erinevusi nende ekstraktide koostises. Monoterpenoidid, sesquiterpenoidid, pikaahelalised süsivesinikud, tsüklilised süsivesinikud ja diterpenoidid tuvastatakse massispektromeetria meetodil.
Monoterpenoidid on leitud ainult CO2 ekstraktis. CO2 ekstrakti põhikomponendid on a-pineen, 3-caren, artemisia ketoon (3-seleneen, tritsoseen-1, 1,8-dimetüülfenantreen ja fluoreen.
Hiirekihi ekstraktis iga-aastase gaasikromatograafia massispektromeetriaga tuvastati peamiselt pikaahelalised süsivesinikud ja tsüklilised süsivesinikud, 3-seleneen tuvastati seskviterpenoididest.
Lisaks artemisiniinile, mis on esmase meditsiinilise väärtusega, sisaldab eeterlik õli suurt hulka bioloogilise väärtusega komponente, nagu artemisia ketoon, 1,8-cyneool, borneool jne.
Järeldused
1. Artemisiniini sisaldus mitmesugustes A. annua ekstraktides (õhust osa, õitsemisfaas), mis kasvab Buryatia Vabariigi territooriumil, määrati HPLC-MS abil.
2. Maksimaalne artemisiniini sisaldus leitakse CO2-ekstraktist (0,054% a.s.c järgi),
3. Kromatograafilise massispektromeetria abil uuriti erinevate ekstraheerimismeetoditega ekstraheeritud eeterliku õli koostist.
Artemisia annua L.
Taksoni kirjeldus
Vene nimed
Süstemaatika
Pildid
Taimed kaardil
Botaaniline kirjeldus
Artemisia annua L. Sp. pl. (1753) 847; Bess. Nouvis. Mem. Soc. Nat. Mosc. III, 81; Dc. Prodr. VI, 119; Ldb. Fl. Ross. II, 592; Boiss Fl. või. III, 371; Maxim Bull. Acad. Sc. Petersb. Viii, 528; Hook Fl. Br. Ind. III, 323; Com fl. Manch. III, 659; Nakai, Fl. Korea keel. II, 30; Fedch. Nimekiri var. Turk IV, 200; Rydb. Põhja-Am. Fl. 34, osa 3, 259; Pampan Nuovis. Giorn. Bot. Ital. n.s. XXXIV, 637; Hall ja Clem. Artem (1923) 102; Com ja alice. Valida. var. Kaug-Idas kr. II, 1036; Krasheninn. fl. kagus Europ Osa USSR, VI, 357; Grossg. Fl. Kavk. IV, 138; Krasheninn. ja tiivad. Fl. Zap. Sib. XI, 2816; Pole Mayevsky, FL. 586. - A. chamomila Winkl. Tr. Peterburi bot Aed, X, 87; Fedch. cit. cit. - Ic.: Amm. Stirp. rar. t. 193, f. 23; Gmel. Fl. sib. II sakk. 25. - Exs: ГРФ № 3152. - Üheaastane koirohi.
Aastane Taim on aromaatne, roheline, paljas või hajutatud, väikeste külgnevate karvadega, sirge, ribitatud, pruunikas või lilla-pruunikas vars 30–100 cm pikk. lehed on punkt-fossa-ferruginous, alumine petiolate, 3-5 cm pikk. ja 2-4 cm laiused., ovaalsed, kolmekordsed pinnakujulised, viimase järje segmendid piklikud, lühikesed; terved või 1-2 hammaga, 1-2 mm pikkused. ja laiusega 0,5 mm; kesk- ja varre lehed on topeltpinnad, ülemine külg, väiksem ja vähem keeruline, ülemine kronstein on lihtne või väikese arvu külgmiste lobulitega. Korvid on kerakujulised, laiused 2-2,5 mm, arvukad, tagasi lükatud või libisevad, lühikestel harudel kokku tõmmatud, b. m. pikk, püramiidne põrniku õisik; ümbris on sile, välised voldikud on lineaarselt piklikud, rohelised, sisemised ovaalsed või peaaegu ümmargused, serva ümber on laia servaga läikiv; mahuti kumer, palja; marginaalsed lilled, 10–20 arvul, kroonfilee, dot-näärmed, kitsalt lineaarsed, häbimehed, nüri, torust; ketaste lilled on biseksuaalsed, 12–30, kitsastega torukujuline, alasti; anteed kitsalt lineaarsed, ülemine osa piklikud, ägedad nurkad, basaalhargid väga lühikesed, terav; kolonn on lühem kui tolm, stigma häbimärgistus on lineaarne, sirge, veidi kõrvale kaldunud, tipu tipus; achenes 0,8–0,6 mm pikkused, piklikud ovaalsed, lamedad, tipus väikese ümardatud platvormiga, vaevalt servast mööda. Värv VIII - IX.
Keelatud kohtades eluaseme, aedade, aedade läheduses. - Euroopa. h.: Ülem-Dnester., Ülem-Dnepri., Volz. Don., Volga., Alam. Don., must., Bess., Krim; Kaukaasia: lääne ja idapoolne. Trans., Tal., Kolmapäev Aasia: Aral-Casp., Balkh., J.-Tarb., Tien-Shan., Syr-Dar., Pam. - Al., Amu-Dar., Horn. Turk Kokku var.: Kolm Heb., Srediz., Balk. -Maloaz., Arm.-Kurd., Iraan, J.-Kashg., Kit., Jap., Mongoolia, Põhja. Ameerika (välismaalane).
Vaade on Ammani ja Gmelini joonistused.
Khoz. väärtus Eeterliku õli saagis on 0,1–0,64% (vastavalt Goryaevile). Joshikazu Imade (1937) andmetel on õlis Cineol ja aine C10H6O; seda ainet on põhjalikult uurinud Ashania ja Joshitomi (1917); koos artemacyaketoniga leiti õlis isomeeri isoartemisiatsetoon. See ketoon oli võimeline isoleerima emalahusest, mis oli jäänud artematiatsetooni semikarbosooni valmistamisse. Seisi Takagi (1928), jätkates Jaapani A. annua uuringut neljale õli koostisosale, lisasid veel kaks uut: cadinene ja karyophillen. Rutovski ja Vinogradovi (1929) uuringute põhjal koosneb õli a-piinist, cyneoolist, kampeenist, artemisiaketoonist ja isoartemisiesetoonist, väikesest kogusest borneoolist, äädikhappest ja võihappest, kimunoaldehüüdist (eeldatavalt semikarbosoonist) ja fenoolist (tõenäoliselt eugenoolist). Väikeses koguses alkaloide leiti maa-alustes osades (Lazurievsky, Sadykov, 1939; Massagetov, 1947). Põllu (Yunatov, 1954) tähelepanekute kohaselt ei sööta loomakasvatus rohelises olekus. Alkaloidide olemasolu kinnitab M.I. Goryaeva, G.K. Kruglykhina, E.I. Satdarova (1959).
Abstrakt ja väitekiri meditsiini kohta (04/14/02) teemal: Artemisia annua L. ja Artemisia sieversiana Willd'i farmakoloogiline uuring. Burjaatia taimestik
Meditsiinilise väitekirja kokkuvõte teemal "Artemisia annua L. ja Artemisia sieversiana Willd'i farmakoloogiline uuring". Burjaatia taimestik
Käsikirjana
Soktoeva Tuyana Erdemovna
FARMAKOGNOSTIKA TEADUSUURINGE ARTEMISIA ANNUA L. JA ARTEMISIA SIEVERSIANA WILLD. BURYATIA FLORA
04/14/02 - farmaatsia keemia, farmakognosia
Ravimiteaduse kandidaadi väitekirja kokkuvõte
Väitekiri tehti Vene Föderatsiooni Haridus- ja Teadusministeeriumi föderaalse riigieelarve haridusasutuses „Burjaat Riiklik Ülikool“ ning Vene Teaduste Akadeemia Siberi filiaali Baikali Keskkonnahalduse Instituudi Vene Teaduste Akadeemia asutamine.
Juhendaja: keemiateaduste doktor, professor
Radnaeva Larisa Dorzhievna
Ametlikud vastased: bioloogiateaduste doktor, professor
Antsupova Tatyana Petrovna
Ravimiteaduste kandidaat Mongolov Hanhai Purbuevich
Juhtiv organisatsioon: Permi riik
Venemaa Föderatsiooni tervishoiu- ja sotsiaalarengu ministeerium
Kaitsmine toimub 23. detsembril 2011 kell 10 °, doktoritöö nõukogu DM 003.028.02 koosolekul SB RASi üld- ja eksperimentaalbioloogia instituudis aadressil 6, Sakhyanova St., Ulan-Ude, 670047.
Väitekiri on kättesaadav SB RAS Buryati teaduskeskuse teaduslikus keskraamatukogus.
Kokkuvõte avaldati 22. novembril 2011.
Väitekomisjoni teaduslik sekretär Bioloogiateaduste kandidaat
TÖÖ ÜLDINE KIRJELDUS Teema asjakohasus. Perekonna Artemisia (koirohi) taimed on paljutõotavad bioloogiliselt aktiivsete ainete allikad, nagu tarragon koirohi Artemisia dracunculus L., koirohi Artemisia absinthium L., koirohi Artemisia vulgaris L. kasutatakse laialdaselt rahvamuusikas, traditsioonilises meditsiinis ja toiduainetööstuses. Artemisia annua L., iga-aastane koirohi, tutvustati paljudes riikides edukalt kultuuri ja 2001. aastal soovitas WHO seda kui peamise artemisiniini allikat, mis on malaaria esimese rea ravi. Tänapäeval annavad artemisiniini tootvad riigid umbes veerandi ülemaailmsetest tervisevajadustest (Tolstikova, 2010; Xiao Wang, 2011). 137-aastastest isoleeriti 137 bioloogiliselt aktiivset ühendit, sealhulgas 40 sesquiterpenes, 10 triterpeeni, 7 kumariini, 46 flavonoidi, mis võivad olla ravimi väljatöötamise aluseks (Bhakuni, 2001). 20. sajandi kaheksakümnendatel aastatel püüdis rühm teadlasi (Schroeter, 1989) kasvatada NSVLi üheaastase taimestiku metsikut kasvavat osa Moskvas. Tänapäeval viiakse Tomski Riiklikus Ülikoolis läbi esimesed aastad. Burjaatia n. On iga-aastane metsikult kasvav liik.
Koos iga-aastase parasiidiga Burjaatias on levinud Sivers koirohi Artemisia sieversiana Willd, mis on ka paljutõotav liik. Seabera rohi sisaldab flavonoide, eeterlikku õli, kumariini (Tkachev, 2002; Shatar, 1998; Hanina, 1999; Suleimenov, 2009). Sifeeri eeterlik õli on huvipakkuv kaamaseeni allikana, mittetoksilise ühendina, millel on põletikuvastane, bakteritsiidne, regenereeriv toime (Berezovskaya, 1991; Khanina, 1992).
Seni ei ole Buryatia iga-aastase taimestiku Siversi koirohi ja koirohi üksikasjalik keemiline uuring läbi viidud paljulubavate bioloogiliselt aktiivsete ainete allikatena, mistõttu nende uuring on kiireloomuline ülesanne.
Eesmärk: Sivers koirohi Artemisia sieversiana Willd'i farmakoloogiline uuring. ja koirohi aastane Artemisia annua L. kui bioloogiliselt aktiivsete ainete väärtuslik allikas.
Selle eesmärgi saavutamiseks on vaja lahendada järgmised ülesanded:
1. tuvastada ühe aasta vanuste Siversi ja P. õhust osa anatoomilised ja diagnostilised märgid, et luua kaubandusnäitajad
tooraine hindamine, reservide hindamine ja saagikoristuse võimalus lk 1 ja lk Siversa Buryatia Vabariigi territooriumil
2. Uurida nende taimede bioloogiliselt aktiivsete ainete põhirühmade keemilist koostist ja määrata nende kvantitatiivne sisaldus, määrata eeterlike õlide ja artemisiniini lokaliseerimine taime üksikutesse osadesse, uurida nende kogunemise dünaamikat arengufaasides ja määrata optimaalsed kogumise tingimused;
3. Töötada välja meetod artemisiniini kvantitatiivseks määramiseks ühe-aastase õhust osa;
4. Määrake kindlaks põhilised bioloogiliselt aktiivsete ainete sisalduse kvaliteedinäitajad ja -standardid, töötama välja ravimite toormaterjalide regulatiivsed dokumendid - Sivers koirohu rohi ja ühe aasta koirohu rohi.
Teaduslik uudsus. Sivers ja P. aastase rohu peamised diagnostilised tunnused loodi, töötati välja toormaterjalide standardimiseks vajalikud arvnäitajad.
Uuriti Siversi rohu ja ühe-aastase rohu keemilist koostist. Määrati eeterlike õlide, flavonoidide, rasvhapete, makro- ja mikroelementide sisaldus. Flavonoidid - luteoliin-7-glükosiid, rutiin, kvertsetiin ja krüoterool tuvastati HPLC-MS meetodil nendes taimedes. Peamised rasvhapped uuritud koirohuli tüüpides on palmitiinsed, linoolsed, linoleensed, 10% oktadekeenhapet leidub ka olulises koirohus.
Artemisiniini ekstraheerimise tingimused (ekstraheerimisviis, ekstraheerimismeetod, ekstraheerimisaeg) määrati iga-aastastest ürdidest ja tehti kindlaks, et artemisiniini maksimaalne ekstraheerimine saavutatakse ultraheli ja subkriitilise CO2 eraldamisega. HPLC-MS abil on kindlaks tehtud, et ühe aasta vanuses artemisiniini suurim kogus sisaldub õisikutes õitsemise faasis.
Uuriti eeterliku õli kogunemise dünaamikat sõltuvalt arengufaasist ja taimeosast. Suurim kogus kaamaseeni eeterlikku õli p. Siversa koguneb õisikute ja õitsemise faasides.
BAS-i kehtestatud kvaliteedinäitajad sisalduvad regulatiivsetes dokumentides.
Praktiline tähtsus. Siversi asula reservid ja võimalik aastane hankemahu maht ning ühe aasta arveldus Buryatia Vabariigi territooriumil (Siversi asula - 0,1 kuni 73,7 tonni aastas ja ühe aasta arveldus - 1,2 kuni 122,3 tonni aastas).
Artemisiniini kvantitatiivseks määramiseks p. Grassis on välja töötatud iga-aastane HPLC-MS meetod. Artemisiniini kvantitatiivseks määramiseks vajalike toorainete proovide ettevalmistamise tingimused on teaduslikult põhjendatud.
Toorainete standardiseerimine on läbi viidud, välja töötatud FS projektid - “Sivers Wormwood Herbal” ja “Wormwood One-Year Grass”.
Rakendamise aste. Eeterliku õli ja mikroskoopiliste analüüsiandmete väljavõtmise meetodit testiti ja tutvustati Föderaalse Riikliku Kõrghariduse Haridusasutuse Farmaatsiaosakonna haridusprotsessis “Burjaat Riiklik Ülikool” (6. septembri 2011. aasta rakendusakt nr 1). FS-i projektid Sivers'i koirohu ja ühe aasta koirohu puhul valmistatakse ette tasu eest.
Kaitsele võetakse välja:
• Buryatias kasvava Siversi ja P. anatoomilise struktuuri, varude, autentsuse kriteeriumide uuringu tulemused;
• bioloogiliselt aktiivsete ainete keemilise uuringu tulemused ja nende hooajaline dünaamika;
• Siversi maapealse osa standardimise uuringute tulemused lk ja lk 1 aasta.
Töö aprobatsioon. Töö peamised sätted esitati ja arutati: rahvusvahelisel osalusel toimuv teaduslik-praktiline konverents „Traditsioonilise meditsiini areng Venemaal: kogemused, uuringud, väljavaated” (Ulan-Ude, 2010); 7. Winter Simposium on Chemometrics "Kaasaegsed andmete analüüsimeetodid" (Peterburi, 2010); rahvusvaheline teaduskonverents, mis on pühendatud Buryati Riikliku Ülikooli 15. aastapäevale "Baikali Aasia tegelikud uuringud" (Ulan-Ude, 2010); V rahvusvaheline teadus-praktiline konverents "Baikali piirkonna arengu prioriteedid ja tunnused" (Ulan-Ude, 2011); X rahvusvaheline teadus-praktiline konverents "Lõuna-Siberi ja Mongoolia botaanika probleemid" (Barnaul, 2011); IV Vene-Vene konverents "Uued edusammud taimsete materjalide keemia ja keemilise tehnoloogia valdkonnas" (Barnaul, 2009); XVI rahvusvaheline üliõpilaste, doktorantide ja noorte teadlaste konverents "Lomonosov-2009" (Moskva, 2009); XV Rahvusvaheline Ökoloogiline Üliõpilaste Konverents "Venemaa ja selle lähiümbruse ökoloogia" (Novosibirsk, 2010); II üliõpilaste, kraadiõppurite ja noorte teadlaste kogu-vene teaduslik-praktiline konverents "Keemia-, biotehnoloogia- ja toiduainetööstuse tehnoloogiad ja seadmed" (Biysk, 2009); Vene-vene teaduslik-praktiline konverents "Taimestik
Baikali piirkond ja külgnevad territooriumid ”(Ulan-Ude, 2011); V Venemaa noorte teadlaste kooliseminar “Piirkonna säästva arengu probleemid” (Ulan-Ude, 2009); piirkondlik noorte teaduslik-praktiline konverents rahvusvahelise osalusega "Keskkonnasõbralikud ja ressursside säästvad tehnoloogiad ja materjalid" (Ulan-Ude, 2010).
Töö viidi läbi uurimisprojektide raames: RFBR: 08-04-90202-Mong_a "Kesk-Aasia bioloogiliselt aktiivsete ühendite biosünteesi biogeneetiliste uuringute uurimine" (2008-2009), 08-04-98037-r_sibir_a "Taimede keemiline koostis indikaatorina Baikali piirkonna ökosüsteemide seisund "(2008-20 Yugg,); interdistsiplinaarne integratsiooniprojekt nr 93 "Uuringute arendamine meditsiinilise keemia ja farmakoloogia valdkonnas kui teaduslik alus kodumaiste ravimite arendamiseks"; ühisprojekt Mongoolia Teaduste Akadeemiaga "Uute lipo - ja nanosomaalsete ravimivormide saamine looduslike toorainete abil"; RFBR: 10-03-16001-mob_ros "Noorte teadlaste liikuvus" (2010), 11-03-90705-mob_st Venemaa noorte teadlaste teadustöö (koolitus) Venemaa Föderatsiooni juhtivates teadusorganisatsioonides 2011 (2011).
Väljaanded. Tulemuste kohaselt avaldati 17 teadustööd, millest 3 avaldati Vene Föderatsiooni Kaitseministeeriumi kõrgema atesteerimiskomisjoni soovitatud perioodikaväljaannetes.
Töö ulatus ja struktuur. Doktoritöö on esitatud 172 leheküljel trükitud teksti kohta, mis koosneb sissejuhatusest, kirjanduse ülevaatest (1 peatükk), eksperimentaalsest osast (4 peatükki), üldistest järeldustest, viidete ja rakenduste nimekirjast. Töö illustreerib 37 tabelit ja 61 numbrit. Bibliograafiline indeks sisaldab 139 allikat, sealhulgas 42 välisriiki.
Sissejuhatuses selgitatakse teema asjakohasust, formuleeritakse uuringu eesmärk ja eesmärgid, tutvustatakse töö teaduslikku uudsust ja praktilist tähtsust.
Esimeses peatükis (kirjanduse ülevaade) on esitatud andmed keemilise koostise, farmakoloogilise aktiivsuse spektri, Artemisia L. perekonna kasutamise kohta traditsioonilises ja kaasaegses meditsiinipraktikas.
Teises peatükis (materjalid ja meetodid) esitatakse andmed uuringu objektide, kasutatud meetodite, seadmete ja reaktiivide kohta, muu metoodiline teave.
Kolmandas ja neljandas peatükis esitatakse andmed Severs S ja ühe aasta vanuste anatoomiliste ja diagnostiliste märkide uurimise kohta. Meetodi järgi
UV-spektrofotomeetria määras uuringu objektides flavonoidide ja tanniinide üldsisalduse. GC-MS abil uuriti eeterliku õli ja koirohu rasvhapete kvalitatiivset ja kvantitatiivset koostist. HPLC-MS meetod kehtestas flavonoidide kvalitatiivse ja kvantitatiivse sisalduse. Taimede elementide koostis määrati AAS meetodil. On välja töötatud ja välja pakutud artemisiniini sisalduse kvantifitseerimise meetod. HPLC-MS abil. Lisaks uurisime viie tüüpi polünya eeterlike õlide keemilisi koostisi, mis on kõige enam levinud Burjaatia ja Mongoolia territooriumil - Gmelin Artemisia gmelinii Web koirohi. et Stechm., koirohi, hall Artemisia glauca Pall, ex Wild., koirohi, suurharjas Artemisia macrocephala Jacq. ex Bess., Sievers koirohi Artemisia sieversiana Willd. ja Artemisia annua L.
Viiendas peatükis on esitatud andmed ühe-aastase Siversi ja P. herbide standardiseerimise kohta, mida pakutakse vastavalt paljutõotavateks kaamaseeni ja artemisiniini allikateks.
Töö peamine sisu
Uurimise objektid ja meetodid. Uuringu objektiks olid Siversi rohu proovid ja iga-aastased külad, mis koguti Irkutski piirkonna (Olkhoni saar) ja Mongoolia (Selenginsky Aimak) mitmetes Buryatia Vabariigi (Ivolginsky, Pribaikalsky, Selenginsky, Tunkinsky, Zakamensky, Kurumkansky) piirkondades. kuni 2011. aastani
Mikroskoopiline analüüs viidi läbi vastavalt artiklile "Mikroskoopilise analüüsi tehnika" (GF XI, väljaanne 2) mikroskoobidel (Lomo, Venemaa) okulaariga 10x; läätsed 4x, 10x, 40x ja MS-300 (TFXS), fluorestsentssüsteemide komplekt (Micros, Austria) okulaariga 10x; läätsed 4x, 10x, 40x. Tooraine saagikus määrati raamatupidamiskohtade meetodil.
Eeterliku õli ekstraheerimine viidi läbi hüdrodistillatsiooniga, ekstraktid saadi ultraheli ekstraheerimisel, CO2 ekstraheerimisel ja leotamisel.
Nende objektide kvalitatiivse ja kvantitatiivse koostise uuring viidi läbi järgmiste meetoditega: GC-MS, HPLC-MS, TLC, BC, UV spektrofotomeetria ja AAS. Kromato-spektromeetriline analüüs viidi läbi Agilent 6890 gaasikromatograafil HP MSD 5973N quadrupole massispektromeetriga (Agilent Technologies, USA; kolonnid: HP-5ms, g = 0,25 mm, kile paksus 0,25 um (kopolümeer - 5%, difenüül - 95% dimetüülsiloksaani) ja DBWaxi siseläbimõõduga 0,25 μm, kandegaas - heelium, g) vool 1–1,5 ml / min; HPLC-MS analüüs viidi läbi suure jõudlusega vedelikkromatograafidel Finnigan Surveyor (Thermo Scientific, USA) ja Agilent 1200 (Agilent Technologies,
USA) massi selektiivse detektoriga “LCQ Advantage MAX” („ioni lõks”) brändi „Finnigan” (Thermo Scientific, USA) ja tandem-massispektromeetrilise detektoriga („ioonilõks”) 6330 (Agilent Technologies, USA), meetod ionisatsiooni elektropihustus; tingimused: Hypersyl Gold Cl8, 5 mikronit, 150x4 mm kolonnid (Thermo electronic Corporation, USA) ja Zorbax Eclipse C18, 5 mikronit, 4,6 x 150 mm (Agilent Technologies, USA), eluendi voolukiirus 0,5 ml / min. TLC analüüs viidi läbi Sorbfil PTSH-P-A-UV plaatidel (Imid Ltd, Venemaa); BC analüüs viidi läbi FN 6 paberil (Filtrak, Saksamaa); Absorptsioonspektrid registreeriti StellarNet Green Waiv spektromeetril (StellarNet Inc, USA), AAC analüüs viidi läbi SOLAAR MB spektrofotomeetriga (Thermo Scientific, USA) ja Varían mudel AA240 (Varian, Venemaa).
Katseandmete statistiline töötlemine viidi läbi variatsioon-statistilise analüüsi meetodil. Osa andmetest töödeldi CIM-i poolt (tarkvarapakett Sirius versioon 6.0, Pattern Recognition Systems, a / s, Norra).
P. Siversi ja P. suvi ravimtaimede farmakognostilised omadused. Järgmised ravimite tooraine kvaliteedi näitajad. Grass sibers koirohi. Kogu tooraine. Üle 45 cm pikkused õitsemisvarre tahked või osaliselt lehtköied, mis ei sisalda varre jämedaid osi. Varre karvane, sirge, soonikkoes ja hargnenud. Radikaalsed ja keskmised lehed on petiolaadid, kolmnurksed, kolmekordsed, piklikud lamedad viilud, 1,4 - 2,5 cm pikad, 0,1 - 0,5 cm laiused, poolkerakujulised korvid, läbimõõduga 0,4 - 0,6 cm, lai paniculate õisik. Edge püstiõied (seal on umbes 18). Lilled biseksuaalsed, arvukad, lehtri kujuga korolla.
Rohu-koirohi aastas. Kogu tooraine. Üle 50 cm pikkused õitsemisvarre tahked või osaliselt lehtköied, mis ei sisalda varre jämedaid osi. Varras on palja, sirge, kortsus, roheline kasvuperioodi alguses, tume lilla lõpus. Alumise ja keskmise varre lehed on lehtedel ovaalsed või ovaalsed, 1,5–7,0 cm pikkused, pikkusega elliptilised, ilma tiivadeta, kolm korda üleekspresseeritud laieks segmentiks, segmentideks ja segmentideks, 0,5 kuni 0,8 cm pikkused, mitte laied üle 0,2 cm korvid, mille läbimõõt on umbes 0,2 cm.
P. Siversi ja P. rohu anatoomilise uurimise käigus tuvastati aasta jooksul mitmeid anatoomilisi ja diagnostilisi omadusi. Koirohi lehtede struktuur on esitatud tabelis 1. Sivers koirohi vars on jäme, piklikud epidermise rakud.
On eeterlikke õli näärmeid, T-kujulisi karvu ja ümarad stomatoosirakud. Varras on kimp tüüpi struktuur. Ribides on sihvapinnad. Rõngaspaelad, mis on paigutatud ringi, on iseloomustatud tugevalt arenenud sklerenhüümiga. Hästi märgistatud endoderm, mis koosneb suurest, õhukese seinaga, ümmarguse kujuga rakkudest, tihedalt üksteise kõrval.
Siversi lehtede anatoomilise struktuuri karakteristikud ja lk.
Sivers koirohi epidermise koirohi aastas
ülemine sirge seina sirge sein
alumine mähise sein on madal
Ustigichesky aparaadi ülemise anomotsüüdi tüüp
madalam anomotsüütiline, stomata rohkem kui lehe ülemisel küljel
stomata ovaalne kuju läätse stomatalrakkudega
T-kujuliste karvadega tihedalt karvaste karvade iseloomustus, mis koosnevad kahest, neljarakulistest jalgadest ja mitmerakulistest karvatest karvadest, on kahte tüüpi karvad - stellate ja T-kujuline ning mitmekihiline jalg
terpenoidi sisaldavad struktuurid on mitmerakulised, suured eeterlike õlide näärmed. skisogeensed mahutid ja mittespetsiifilised parenhümaalsed rakud
üheaastase, soonelise, peaaegu palja varre, piklike epidermise rakkude juures. Nii ühe aasta vanuste kui ka s. Siversi vars, puchkovy tüüpi konstruktsioon, esineb eeterlikke õli näärmeid, harva karvu ja ovaalseid stomataalrakke; Mõlemas koirohuliigis on torukujuliste lillede korpusel olevad epidermise rakud õhukese seinaga, piklikud ja teravate otstega, mida iseloomustab suur hulk eeterlike õlirakkude olemasolu ja karvade puudumine.
Mitme toorainepartii kohta on kehtestatud müüginäitajad:
Grass sibers koirohi. Niiskus (mitte üle 7%), tuhk (mitte üle 11%), 10% vesinikkloriidhappes lahustumatu tuhk (mitte üle 2%), kaevandavad ained (vähemalt 33%), pruunid ja mustad (mitte üle 5%) ), orgaaniline lisand (mitte üle 2%), mineraalne lisand (mitte üle 0,5%).
Rohu-koirohi aastas. Niiskus kuni 7%, tuhk kokku (mitte üle 9%), 10% vesinikkloriidhappes lahustumatu tuhk (mitte üle 1%), kaevandavad ained (vähemalt 42%), pruunid ja mustad (mitte üle 5%), orgaaniline lisand (mitte üle 2%), mineraalne lisand (mitte üle 0,5%).
Esialgse fütokeemilise analüüsi tulemuste põhjal leiti Sivers ja P. rohu eeterlik õli, flavonoidid, tanniinid, hüdroksükinnamiinhapped, kumariinid, rasvhapped ja sesquiterpene laktoonid.
Üheaastased Siversi ja P. varud. Tabelis 2 on toodud andmed Siversi saagikuse, bioloogiliste (BZ) ja tegevusreservide (EZ) kohta ning iga-aastased andmed, mis kasvavad Buryatia eri piirkondades.
S. Siversi tooraine varud ja ühe aasta pikkused Buryatia alad
saagi pindala (g / m2) E kogu kasv, (ha) BS (kg) EZ (kg)
env Gusinoozerski linn 58,0 ± 4,1 0,8 530,0 398,4
env c. Ganzurino 33,8 ± 2,4 0,4 154,4 116,0
env c. Boraadid 220,6 ± 15,1 20,0 50160,0 41100,0
env Taphar 500,0 ± 26,3 0,5 2763,0 2237,0-ga
env c. Sotnikovo 240,2 ± 19,4 25,0 69750,0 52850,0
env Ulan-Ude 500,0 ± 32,5 0,5 2815,0 2175,0
Kabansky piirkond 285.SH = 19,7 30,0 97320,0 73680,0
Tunkinsky piirkond 70,0 ± 8,0 0,2 172,0 108,0
Pribaikalsky piirkond 280,9 ± 25,3 1,0 3315,0 2297,0
Kurumkansky piirkond 370,6 ± 34,0 0,1 438,6 302,6
env c. Hurumsha 228,0 ± 10,8 0,6 14,97,6 1238,4
env Rahvastik 500,0 ± 46,2 30,0 177720,0 122280,0
env c. Sotnikovo 39,0 ± 2,1 25,00 10800,0 8700,0
Kabansky piirkond 400,0 ± 27,1 30,0 136260,0 103740,0
Sivers koirohi maapealse osa ja iga-aastase põlvkonna tootlikkus uuris uuritud paksenemistel vastavalt 33,8 ± 2,4 kuni 500,0 ± 32,5 g / m2 ja 39 ± 2,1 kuni 500 ± 46,2 g / m2. Uuritud taimede maapealsete osade bioloogilised ja tegevusreservid on 154,4-97320,0 kg ja 116,0-73680,0 kg (Sivers koirohi), 1 497,6177720,0 kg ja 1238,4-122280,0 kg (iga-aastane koirohi).
P. Sivers'i ja P. iga-aastase flavonoidide taime keemiline uuring. Flavonoidide üldine kvantitatiivne sisaldus määrati Sivers ja P. üheaastaste muldade rohumaal üldtunnustatud spektrofotomeetrilise määramise meetodil luteoliin-7-glükosiidi järgi taimede arengu erinevates faasides (taimestik, õitsemine, õitsemine, viljakasvatus). Suurim flavonoidide sisaldus määrati Seversi ja ühe aasta vanuste proovide puhul, mis olid kogutud lootmise faasis - 0,68 ja 0,66%, madalaim - tooraines kogutud tooraines - 0,31% ja 0,38% (tabel 3).
Flavonoidide koguse kvantitatiivne sisaldus luteoliin-7-glükosiidi osas P. Siversi rohus ja P. rohus ühe aasta jooksul sõltuvalt taimestiku faasist
taimede arengufaas, flavonoidide kogus luteoliin-7-glükosiidi (%) t
Wormwood Sivers koirohi aastas
taimestik 0,67 ± 0,02 0,64 ± 0,04
0,68 ± 0,05 0,66 ± 0,03
õitsemine 0,48 ± 0,03 0,52 ± 0,02
vilja 0,31 ± 0,01 0,35 ± 0,01
HPLC-MS meetodil tuvastati järgmised flavonoidid: rutiin, luteoliin-7-glükosiid, krüo-eriool, kvertsetiin Sivers'i rohus ja ühe aasta vanuses rohus (joonis 1).
Joonis 1. Flavonoidide ja P. Sivers, P. kromatogramm ühe aasta jooksul.
Rutiini, kryserooli, kvertsetiini kvantitatiivse sisalduse määramiseks Sivers'i rohus ja ühe aasta vanuses rohus kasutati välist standardmeetodit (tabel 4).
Mõlemat liiki koirohi, luteoliin-7-glükosiid 0,04-0,08% (Sivers) ja 0,88–1,77% (n. Üheaastane) on suurim kogus, kvertsetiin 0,001% (Sivers) ja 0,0070,009% (n üks aasta).
Flavonoidide kvantitatiivne sisaldus (HPLC-MS)
Sivers Wormwood Flavonoid kollektsioon (%)
rutiini kvertsetiin luteoliin-7-glükosiid
Ivolginsky piirkond, okr. c. Taphar, 0,002 ± 0,0001 0,001 ± 0,0002 0,040 ± 0,003
Ivolginsky piirkond, okr. lk. Sotnikovo 0,002 ± 0,0002 0,001 ± 0,0001 0,080 ± 0,005
FLY on üks aasta vana ja Ivolginski piirkond, okr. lk. Sotnikovo 0.018 ± 0.001 0,007 ± 0,0003 0,880 ± 0,004
Kabansky piirkond, okr. c. Prussakas 0,012 ± 0,002 0,009 ± 0,0003 1,700 ± 0,005
Rasvhapped. Koirohi proovid sisaldavad 8 kuni 13 rasvhapet. Mõlema liigi puhul on levinud palmitiin (16: 0), linoolhape (18: 2p6), linoleensed (18: ZpZ) happed, koguses 56,87-82,67% (kokku rasvhapetest) Seversis, 58,36-67,19%. n aasta (rasvhapete üldkogus). Lisaks nendele hapetele sisaldab märkimisväärne kogus 10-oktadekeenhapet (18: 1p8) 3,64% -lt 11,65% -ni. Ka kõikides proovides tuvastati 10-metüüldekaanhape (¡° 12: 0) ja 12-metüül-tetradekaanhape (ja 15: 0), nende sisaldus ei ületa 1%. Kromatogrammid on toodud joonisel 2.
Joonis fig. 2. Rasvhapete kromatogrammid (a) lk. Sivers ja (b) lk. Üks aasta (I - (16: 0), 2 - (18: 2: 6), 3 - (18: ЗПЗ), 4 - (18: 1: 8) ).
Elementaarne koostis. Puri Siversi rohus, mis kasvab mitmes Burjaatia piirkonnas, on kaltsiumisisaldus 0,56 ± 0,02-0,89 ± 0,03%, magneesium - 0,12 ± 0,01-0,28 ± 0,01%. Kõrgeim kaltsiumi ja magneesiumi sisaldus on märgitud Kurumkansky linnaosas kogutud proovides, mis on madalaim magneesiumisisaldus Tunkinsky linnaosa tooraines ja kaltsium Selenginski piirkonnas kogutud taimedes. Raud on enamasti leitud Kurumkansky piirkonna taimedest
(141,25 ± 12,13 mg / kg), vähem - Selenginsky piirkonnast (141,25 ± 12,13 mg / kg).
Tsinki sisaldus varieerub 23,73 ± 1,56 kuni 59,8 ± 1,56 mg / kg - п. Sivers ja 55,32 ± 0,83 kuni 66,50 + 0,89 mg / kg on üheaastane, mis on vastuvõetav biokeemiliste protsesside normaalseks toimimiseks. Vase sisaldus on 8,42 ± 0,45-24,30 ± 1,56 mg / kg-n. Siverid, 9,37 + 0,18-13,48 + 0,44 mg / kg - üks aasta (nõutav kogus on 5 kuni 30 mg / kg). Seabera muru nikkel sisaldab 0,40 ± 0,01 -2,06 ± 0,03 mg / kg, mis vastab taimele, mis vajab kiirust 0,1 kuni 5 mg / kg. Kobaltisisaldus tehases ei tohiks ületada 1 mg / kg, plii - 10 mg / kg, kaadmium - 0,2 mg / kg, kroom - 1,0 mg / kg (Kabata-Pendias, 1989; Kashin, 2009). Sivers p. Koobaltisisaldus on väiksem kui 0,3 mg / kg, plii on 3,19 ± 0,11 mg / kg, lk. Üks aasta vana - 0,59 ± 0,02 mg / kg, kaadmium - 0,18 ± 0,02 mg / kg, kroom - 0,76 ± 0,02 mg / kg kõigis proovides. Seega on makro- ja mikrotoitainete sisaldus kontsentratsioonides, mis on normaalsed ja piisavad taimede elutähtsate funktsioonide voolamiseks.
Sivers koirohi ürdi eeterlik õli. Taimede eeterlik õli eraldati farmakopöa meetodil nr. Erinevates p. Proovides on Siversi eeterliku õli sisaldus vahemikus 0,1 kuni 1,9%. Burjaatia erinevates osades kasvavate Siversi eeterlike õlide puhul on tuvastatud rohkem kui 80 ühendit.
Oleme uurinud Siveri koirohu rohust eraldatud eeterlike õlide koostist, mis kasvab Burjaatia erinevates osades
(Ivolginsky (1), Selenginsky (2), Kurumkansky (3), Pribaikalsky (4,9),
Tunkinsky (5), Zakamensky piirkonnad (8), Irkutski piirkond (Olkoni saar) (6) ja Mongoolia (7). Eeterliku õli suurim saagikus on Siversi koirohus, mis kasvab Tunkinsky ja Kurumkansky piirkondades (0,4%). Zakamensky, Pribaikalsky piirkondade ja Mongoolia territooriumil kogutud taimedest eraldati minimaalne õli kogus (0,1%) (joonis 3).
Eeterliku õli kogunemise dünaamikat uuriti sõltuvalt taime arengu faasist (joonis 4). Tulemused näitasid, et kõige rohkem koguneb õli õitsemisfaasis (0,6%)
Joonis fig. 3. Eeterliku õli saagis, kasv.
viljastamise ja vilja saamise faasid koguvad sama palju eeterlikku õli (umbes 0,3%).
1- 1,8-daanool I-terpineaal-4-3-p-farmakoloogia '1 ■ sishna-4,11-dnen
Joonis fig. 5. Eeterliku õli kromatogramm lk Sivers.
Joonis fig. 4. Eeterliku õli saagis p.
Külvikud taime arendamise erinevatel etappidel (kasvuperiood, b - õitsemine, c - õitsemine,
Kõiki eeterliku õli komponente võib jagada kahte rühma - konstantne, see tähendab, et see leidub õli kõigis taimede arengufaasides ja esinevad juhuslikult (väikesed). Kõigis Siversi eeterliku õli proovides, olenemata taimekasvatuspiirkonnast, 1,8-cineool (2,34–22,57%), terpineool-4 (0,964.70%), germakreen E (8,66-12,36%), P-farnezen (0,64-5,17%), Selina-4,11-dieeni (0,97-4,66%), Neril-2-metüülbutanoaati (4,80-8,79%) ja Chamazulene (0,60-25,36%) (joonis fig 5).
Peetera piirkondades kasvavatest taimedest isoleeritud eeterlikud õlid Pribaikalsky piirkonnas (25,36%) sisaldavad väikseimat kogust hamazuleeni ja väikseimat - Zakamensky piirkonnas (0,60%).
Taimedest eraldatud eeterliku õli koostises - taimestikus, õitsengus, õitsemises ja viljas - tuvastati 54 ühendit. Püsivaks komponendiks on 1,8-cyneool, linalool, terpineool-4, a-terpineool, p-farnezen, selina-4,11-dieen, chamazulene.
Kamasuleenisisaldus varieerub vegetatsioonifaasis vahemikus 0,20 kuni 24,69%, alates 21,34% -lt 61,91% -le kasvufaasis, 1,53-st kuni 34,42% -ni õitsemisfaasis, 10,87% -lt 20,64% -ni viljafaasis. Aeg-ajalt esinevate komponentide kogum on oluline (kuni 40 ühendit) samal ajal nende vähese kvantitatiivse sisaldusega, mistõttu on raske kindlaks teha nende koostise sõltuvust taime arengu faasist.
Arendamisfaasi mõju hindamiseks õli komponentidele kasutati CIM-i (joonis 6).
Joonis fig. 6. GK-mudel sõltuvalt koostisest
Siversi arengufaasi eeterlik õli (I-taimestik, 2-õitsev, 3-õitsev, 4-puuviljane)
see on üks analüüs
mitmemõõtmelised andmed, mis võimaldavad jaotada varjatud muutujaid suurtes andmemaarides ja analüüsida suhteid,
olemasolevas süsteemis. Põhikomponendi meetodi eesmärk on asendada proovide esialgne kirjeldus p muutujatega uue vormi jaoks, mis on esindatud põhikomponentide ruumis (Esbenson, 2010).
GK-mudelil on võimalik eristada üksteisest eraldatud eraldatud alasid, mis vastavad Sivers koirohu erinevatele arengufaasidele, mis näitab, et õli koostis erinevates arengufaasides erineb väikeste ühendite sisaldusest.
Seega langeb Siversi arengu erinevatel etappidel eeterliku õli kvalitatiivne koostis ühtlaselt ja erineb väikeste ühendite poolest.
Uurimus taime arengu faaside kohta näitas, et Seversa eeterlikus õlis on suurim kogus kummasuleeni kontsentreeritud õitsemis- ja õitsemisfaasis, samal ajal kui õli kogunemine õitsemisfaasis on suurem kui lootmise faasis. Seetõttu uurisime nendes etappides eeterlike õlide kogunemise iseärasusi taime erinevates osades (joonis 7).
Uimastamise etapi kohta Õitsemise faasis
Joonis fig. 7. Eeterliku õli saagikus Siversi erinevates osades.
õitsemisfaasis saadud taime erinevatest osadest ekstraheeritav eeterlik õli näitas, et õisikud (korvid) iseloomustavad suurimat saagikust, lehed on väiksemad ja varred on minimaalsed. Faasis
P. Siversi muru mäestikus on kõige enam õli pungades, veidi vähem lehed ja minimaalne õli kogus varred.
Taime erinevatest osadest pärit eeterliku õli analüüs näitas, et Siversi õisikestest ja rohumahtudest eraldatud õli komponentide koostis on kõige mitmekesisem, see on üle 70 komponendi, seejärel on üle 40 komponendi lehtedest ja vähem kui kõik varredest ekstraheeritud õlid. komponente. Eeterlike õlide proovide konstantsed komponendid, olenemata nende asukohast, on 1,8-cyneool, linalool, terpineol-4, germacren 13, a-terpineool, a-bisabolool ja kameaseen (tabel 5).
Sivers Wormwood Essential Oil pidevad komponendid
komponentide sisaldus protsentides kogu õlist
õitsemise faasi lootusetapp
õisikud jätavad varred pungad lehed varred
1,8-cineool 8,00 6,39 6,04 1,94 + 23,41
linalool 5,93 1,38 0,65 + + 3,83
terpineool-4 2,56 2,10 0,57 0,88 + 5,37
a-terpineool 2,39 2,10 0,82 1,44 + 4,66
Germakren E 7,20 7,81 1,96 11,18 7,81 10,57
a-bisabolool 2,28 1,25 1,66 5,24 10,93 5,86
Chamazulene 6,23 23,02 37,11 7,81 21,17 3,51
Analüüs näitas, et eri kasvupiirkondades, erinevatel arenguetappidel ja Seversa erinevates osades langeb eeterliku õli kvalitatiivne koostis pidevalt kokku ja erineb sporaadiliselt esinevate ühendite poolest.
Eritiõli koirohi aastasest ürdist. Nagu esimesel juhul, teostati eeterliku õli valik farmakopöa meetodil nr 2. Keemiline koostis p. Aasta eeterlikud õlid on esindatud 40 komponendiga. Püsivad komponendid on artemisia ketoon (10,24–14,62%), karyofüllen (9,93–10,71%), germakreen B (3,53–7,82%), p-seleneen (21,75–29,46%), karyofilleni oksiid (4,44–14,31%) (joon. 8).
Taime arengu erinevatel etappidel ekstraheeritakse koirohu ürdist 0,5 kuni 0,7% eeterlikku õli. Eeterliku õli suurim saagikus õitsemise faasis (0,7%) (joonis 9).
Kõikides taimede arengu etappides sisalduvad eeterlikus õlis artemisia ketoon, karyofillen (3-seleen, karyophylne oxide), põhikomponentide kvantitatiivne sisaldus muutub taime arengu erinevates faasides. ja karyofilleni oksiid - õitsemise faasis.
3. Eeterliku õli kromatogramm lk.
Joonis fig. 9. Eeterliku õli saagis lk. Iga-aastane taimede arengu erinevates etappides (taimestik, b-bud, c-õitsemine, p-vilja).
Eeterlikud õlilõikurid on taimedes ebaühtlaselt jaotunud, seetõttu saab taime erinevatest osadest eristada eeterlikke õlisid, mis erinevad nii kvantitatiivselt kui ka kvalitatiivselt.
Määratud on õitsemisfaasis eeterlike õlide kogunemise iseärasused iga-aastase koirohu erinevates osades (joonis 10).
Taime erinevate osade eeterlikes õlides leiti üle 60 ühendi. Konstant
õisikestest, lehtedest, varredest saadud õlide komponendid on artemisia alkohol, p-karyophillen, oksiid
Iga-aastase eeterliku õli põhikomponendiks on artemisia ketoon - seda ei leidu õlis sisalduvast õlis, kuigi see on pool õisikuist (49,14%) ja peaaegu kolmandik lehtedest (29,76%).
Eeterlike õlide analüüs näitas, et erinevates kasvupiirkondades, erinevatel arengufaasidel ja n. Iga-aastases rohus, samuti n. Sievers'i rohus, on eeterliku õli kvalitatiivne koostis pidevalt ja erinevalt spontaadselt ilmnevatest komponentidest sama.
Artemisiniini kvantitatiivse määramise meetodi väljatöötamine koirohus aasta meetodil HPLC-MS
Artemisiniini kvantitatiivse ekstraheerimise tingimuste valik iga-aastasest koirohust. Töötada välja kvantitatiivne metoodika
1 2 joon. 10. Eeterliku õli saagis iga-aastases erinevas osas (1-õisik, 2-lehed, 3-varred).
Valiti välja ühe aasta vanuste ekstraheerimistingimuste P. pähkli rohu Artemisiniini määramine, mille kohaselt artemisiniini ekstraheerimine saavutab oma maksimaalse väärtuse. Analüüsiti leotamise, ultraheliekstraktsiooni ja subkriitilise CO2 ekstraheerimise abil saadud ekstrakte. Ekstraheerijatena kasutati erinevaid lahusteid (tabel 6). Artemisiniini sisaldus ekstraktides, mis on eraldatud ultraheli ekstraheerimise ja leotamisega, kasutades erinevaid lahusteid, ei erine oluliselt (0,038-0,040%). Artemisiniini suurim kogus (0,054%) sisaldub subkriitilise CO2 ekstraheerimise käigus saadud ekstraktis.
Meetodid ja parameetrid ühe aasta vanuste koirohi rohu ekstraktide ekstraheerimiseks erinevate ekstraheerimismeetoditega ______
ekstraheerimismeetodi ekstraheerimise aeg / ekstraheerimise parameetrid artemisiniini sisaldus protsentides a.s.s.
etanool 24 tundi / toorainete suhe: lahusti (1: 5), T = 25 ° С 0,040 ± 0,002
Maceratsiooni etanool 48 h / toorainete suhe: lahusti (1: 5), T = 25 ° С 0,038 ± 0,002
Heksaan 24 h / proov: lahusti suhe (1: 5), T = 25 ° С 0,039 ± 0,002
etüülatsetaat 15 min / toorainete suhe: lahusti (1: 5), helitugevus 50 kHz, T = 25 ° С 0,022 ± 0,001
etanool 5 min / toorainete suhe: lahusti (1: 5), heli sagedus 50 KHz, T = 25 ° С 0,022 ± 0,001
Etanooli ultraheliekstraktsioon 10 minutit / tooraine suhe: lahusti (1: 5), heli sagedus 50 KHz, T = 25 ° С 0,024 ± 0,001
etanool 15 min / toorainete suhe: lahusti (1: 5), heli sagedus 50 KHz, T = 25C, C 0,039 ± 0,002
etanool 20 min / toorainete suhe: lahusti (1: 5), heli sagedus 50 kHz, T = 25 ° С 0,039 ± 0,002
CO2 24-tunni CO2-ekstraheerimine voolukiirusel 30 l / h, T = 20-22 ° C, P = 6,0-6,2 MPa 0,054 ± 0,003
Kõigist väljapakutud meetoditest on ultraheli ekstraheerimine optimaalne (etanooli ekstraheeriv aine), kuna see meetod on kiire (ekstraheerimise aeg 15 minutit) ja see on kättesaadav instrumentide abil.
Artemisiniini kvantitatiivse määramise meetod.
HPLC-MS-ga viidi läbi meetod artemisiniini kvantitatiivseks määramiseks iga-aastase herbis. Me kasutasime Agilent 1200 HPLC MC-detektoriga ("ioonilõks") 6330, ionisatsioonimeetodit - elektropihustus. Elueerimine viidi läbi isokraatlikus režiimis (50% (A): 50% (B)), lähtepuhvri (A) kompositsioon, sipelghappe vesilahus (pH = 3) + 2 ml küllastatud ammooniumatsetaadi lahust, elueerimispuhver (B) - 100% atsetonitriil. Eluendi ruumala voolukiirus on 0,5 ml / min, süstitud proovi maht on -25 μl. Ionid registreeriti positiivse laenguga ioonide (SRM) jälgimisrežiimis massiga 300 (tulenevalt NrH4 iooni lisamisest artemisiniini molekulile), akna laius (299301) m / z. Tulemused kinnitati tandem-mass-spektromeetriaga, tütar-ioon (MS2) massiga 223 m / z saadi algsest ioonist (MS) massiga 300 m / z.
Artemisiniini retentsiooniaegade ja massispektri kokkusattumine, mis on määratud üheaastase rohu puhul näidatud ühendi CO lahusega, võimaldab meil järeldada, et puhas ühend on identne puhta artemisiniiniga (joonis fig 11, 12).
Joonis fig. 11. CO artemisiniini ja P. iga-aastase ekstrakti kromatogramm.
iv ix язтжяауат ассс »
Joonis 12. A) artemisiniini massispektrid, mis sisalduvad n. Iga-aastases rohus, b) artemisiniin CO.
Kromatograafia-mass-spektromeetria puhul kasutati kvantitatiivseks analüüsiks absoluutset kalibreerimismeetodit. Kalibreerimiskõvera koefitsiendi määramiseks valmistati mitu (vähemalt 20) artemisisiiniini kalibreerimislahust. Lahuste valmistamine viidi läbi järgmiselt: 5 x 10 "3 g artemisiniini kaaluti, pandi 50 ml mõõtekolbi, lisati 25 ml atsetonitriili.
segatakse põhjalikult kuni täieliku lahustumiseni, seejärel viidi kolbi maht destilleeritud veega märgini. Läbiviidud analüüsi läbiviimine süstitud proovi erinevas mahus 1 kuni 40 μl. Mõõdeti kromatogrammide piigi pindala. Saadud andmete kohaselt koostati kalibreerimiskõver (joonis 13). Piigi pindala väärtused joonistati ordinaatteljel ja vastavad artemisiniinisisalduse (g) väärtused joonistati abstsissteljel.
Saadud andmetest arvutati kalibreerimiskõvera koefitsient: к = Б / х, kus к on kalibreerimiskõvera koefitsient, 5 on analüüsitava lahuse piigi pindala, х on artemisiniini (g) sisaldus.
Kalibreerimiskõvera (k) koefitsient on defineeritud kui koefitsientide k aritmeetiline keskmine.
Joonis fig. 13. Artemisiniini sisalduse määramise skeem.
Artemisiniini sisaldus ühe aasta koirohuekstraktis määrati valemiga: C = 5 / c, kus 5 on analüüsitud lahuses artemisiniini piigi pindala ja k on kalibreerimiskõvera koefitsient. Kalibreerimiskõvera koefitsiendi (k) määramise metroloogilised andmed on esitatud tabelis 7.
Artemisiniini kalibreerimiskõvera koefitsiendi arvutamise metroloogilised omadused
1 X Э2 Э Р ЮУ) Дх Е,%
19 1,32 * 10m 1,84 * О15 4,25 * 10 "95 2,09 1,28 * 10" 1,97 1,90 * 10 "
Artemisiniini kvantitatiivse määramise tulemused koirohusekstraktis on esitatud tabelis 8.
Artemisiniini kvantitatiivse määramise tulemused koirohu ekstraktis ühe aasta meetodil HPLC-MS
Metroloogilised omadused (n = 5, P = 95%)
0,039 0,75 * 10 "'0,27 * 10" 2 2,57 0,83 * 10 ° 1,21 0,12 * 10 "
Välja töötatud meetod määras rohu nn ühe aasta vanuse õitsemise faasis artemisiniini kvantitatiivse sisalduse (tabel 9). Meetod on valideeritud - spetsiifilisus, täpsus on kinnitatud.
Artemisiniini sisaldus rohumaa koirohus aastas
Artemisiniini piirkond ja kogumise kuupäev (%)
Ivolginsky piirkond, 10 km kaugusel Sotnikovost, 08/12/2010 0.054 ± 0.003
Ivolginhiy rn, 10 km kaugusel Sotnikovost, 08/22/2011 0.027 ^.001
Ivolginsky piirkond, okr. c. Oriole, 08/19/2011 0.069 ± 0.004
Kabansky piirkond, okr. c. Tarakanovka, 08.22.2011 0.023 ± 0.001
Ivolginski piirkonnas kogutud proovides. T Oriole sisaldab suurimat kogust artemisiniini (0,069%), väikseimat - Kabansky rajooni proovides. c. Prussakas (0,023%). Tehti kindlaks, et kõige suurem osa artemisiniini taimedest kontsentreerub õitsemisfaasis - 0,039%, väikseim - taimestiku ja lootmise faasis - 0,006 kuni 0,007%. Artemisiniinist õisikud sisaldavad - 0,029%, veidi vähem - 0,021% lehtedes ja minimaalne kogus varssides on 0,007% (tabel 10).
Artemisiniini sisaldus koirohu muru rohus, sõltuvalt taimestikust, taime erinevates osades
arendusetapis
taimestik lootustavad õitsemise lehed õisiku varred
0,006 ± 0,0002 0,007 ± 0,0002 0,039 ± 0,003 0,021 ± 0,001 0,029 ± 0,002 0,007 ± 0,0002
Seega on iga-aastase koirohu rohu kogumiseks optimaalne aeg õitsemisfaas ja on soovitav koguda kogu õhust osa.
Kõik saadud tulemused on kaasatud FS projektidesse Sivers koirohu rohu ja iga-aastase koirohu ürdi kohta.
1. Avastati Sivers'i ja P. ühe aasta rohu rohu peamised diagnostilised omadused, töötati välja toormaterjalide standardimiseks vajalikud arvnäitajad. Identifitseeritakse Siversi ja P. varud, mis kasvavad Buryatia Vabariigi eri piirkondades.
2. Flavonoidide, rasvhapete, makro- ja mikrotoitainete sisaldus Sivers n rohus ja n rohus on üks aasta. Flavonoidid - luteoliin-7-glükosiid, rutiin, kvertsetiin ja krüoterool tuvastati HPLC-MS meetodil nendes taimedes. Peamised rasvhapped uuritud koirohuli tüüpides on palmitiinsed, linoolsed, linoleensed, 10% oktadekeenhapet leidub ka olulises koirohus.
3. On kindlaks tehtud, et taimsete eeterlike õlide kvalitatiivne koostis jääb püsivaks, sõltumata kasvukohast ja arengufaasist. Siversi konstantsed komponendid on 1,8-cyneool, terpineool-4, D germacren, p-farneseen, Selina-4,11-dieen, neüül-2-metüülbutanoaat ja kameaseen ning Artemisia ketoon, karyofillen, ühe aasta vanused germakreenid D, p-seleneen, kariofiilne oksiid. Eeterliku õli kogunemine õitsemisfaasis on suurem (0,7%) kui noorendamisfaasis (0,3%). Suurim kogus kaamaseeni p. Sivers koguneb noorendamise faasides (kuni 62%) ja õitsemisele (kuni 34%).
4. Artemisiniini (ekstraheerimisviis, ekstraheerimismeetod, ekstraheerimisaeg) ekstraheerimise tingimused määrati iga-aastastest ürdidest ja tehti kindlaks, et artemisiniini maksimaalne ekstraheerimine saavutatakse ultraheliga ja eelvooluga CO2 eraldamisega. Artemisiniini kvantitatiivse määramise meetod töötati välja ja valideeriti ühe aasta HPLC-MS meetodil (suhteline vea määramine ± 1,21%). On kindlaks tehtud, et iga-aastase ürdi rohu suurim artemisiniini kogus koguneb õitsemise ajal õisikutel (0,039%).
5. Töötati välja toormaterjalide regulatiivdokumendid - FS „Sivers-koirohi rohi” projekt ja FS-i projekt „Kooriku rohi üheaastane”.
Töö teema kohta avaldatud nimekiri
1. Zhigzhitzhapova, C.B. Eeterliku õli keemiline koostis Artemisia gmelinii Web. et Stechm, Kesk-Aasias / C.B. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva ja taime keemia.-2010.-№2.-С. 131-133.
2. Zhigzhitzhapova, C.B. Sivers koirohi eeterliku õli keemiline koostis Artemisia sieversiana Willd., Kasvatatud Burjaatias / S.V. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva, V.V. Taraskin // Buryati Riikliku Ülikooli bülletään. Ser. Keemia-füüsika. - 2009. -. 3. - lk 69-71.
3. Zhigzhitzhapova, C.B. Sivers koirohi eeterliku õli koostis Artemisia sieversiana Willd., Kasvas Burjaatias ja Irkutski piirkonnas / S.V. Zhigzitzitzova, TE Soktoeva, LD Radnaeva, V.V. Taraskin // Vene Meditsiiniakadeemia Siberi haru Ida-Siberi teaduskeskuse bülletään. - 2009. - №2 (66). -C. 103-105.
4. Zhigzhitzhapova, S.V. Eeterliku õli koostis Artemisia sieversiana Willd. taimede arengu eri etappidel / S.V. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // Vene Meditsiiniakadeemia Siberi filiaali Ida-Siberi teaduskeskuse bülletään. - 2011. - №1 (77). 2. osa - lk 138-141.
5. Soktoeva, TE Eeterliku õli komponentide koostis Artemisia glauca Pall, ex Willd. Mongoolia / T.E. Soktoeva, S.V. Zhigzhitzhapova, LD
Radnaeva, B.B. Taraskin // Noorte teadlaste bülletään. - Tomsk, 2011. -Vyp. 2. - lk 27-30.
6. Soktoeva, TE Eeterliku õli keemiline koostis Artemisia gmelinii Web. Et Stechm. / T.E. Soktoev // Lomonosov-2009: XVI interni materjalid. conf. üliõpilased, üliõpilased ja noored teadlased. - Moskva, 2009. - lk 37.
7. Zhigzhitzhapova, C.B. Eritiõli koirohi Gmelini taimestik Burjaatia ja Mongoolia / C.B. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // „Uued saavutused taimsete toorainete keemia- ja keemiatehnoloogias”: IV All-Russia materjalid. teaduslik conf. - Barnaul, 2009. - lk 49-50.
8. Soktoeva, T.E. Buryatia Vabariigis / T.E.s kasvav Sivers koirohi Artemisia sieversiana Willd. Eeterliku õli koostis. Soktoyeva, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // „Keemia-, biotehnoloogia- ja toiduainetööstuse tehnoloogiad ja seadmed”: II Vseross'i materjalid. teaduslik konverentsil üliõpilased, üliõpilased ja noored teadlased. - Biysk, 2009. - lk 91–93.
9. Pavlova E.T. Ravimite komponentide kromatograafiline eraldamine ja kvantitatiivne määramine HPLC / TE abil Soktoeva, T.A. Kolodin // „Regioonide säästva arengu probleemid”: Venemaa noorte teadlaste V-kooli seminari materjalid. - Ulan-Ude, 2009. - lk 222-223.
10. Zhigzhitzhapova, S.V. Kesk-Aasias / S.V.-s kasvava Artemisia L. keemiliste koostiste võrdlusanalüüs. Zhigzhitzhapova, T.E. Soktoeva, L.D. Radnaeva, O. Grahl-Nilsen // „Andmete analüüsi modemimeetodid” seitsmes talvine simposium kemometriaga. - Peterburi, 2010. - lk 82-83.
11. Soktoeva, T.E. Kesk-Aasias / TE-s kasvatatud perekonna Artemisia L. polünia eeterlike õlide koostise võrdlev analüüs Soktoeva // "Keskkonnasõbralikud ja ressursisäästlikud tehnoloogiad ja materjalid": piirkonna materjalid, noorsooteadused. conf. alates Intern. osalemist. - Ulan-Ude, 2010.-S. 109-110.
12. Zhigzhitzhapova, C.B. Artemisia L. / C.B. polünia perekonna eeterlikud õlid. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // „Traditsioonilise meditsiini areng Venemaal: kogemused, uuringud, perspektiivid”: materjalid nauchn. conf. alates Intern. osalemist. - Ulan-Ude, 2010. - lk 405-407.
13. Soktoeva, T.E. Õhu- ja vendade eeterliku õli koostis koirohi Artemisia sieversiana Willd. / T.E. Soktoeva, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // “Baikali Aasia tegelikud uuringud”: Interni materjalid. teaduslik Conf, - Ulan-Ude, 2010. - lk 309-312.
14. Badmaeva, E.E. Eeterliku õli koostis Artemisia macrocephala Jacq. endine Bess kasvab Mongoolias / E.E. Badmaeva
T.E. Soktoeva // “Venemaa ja selle lähiümbruse ökoloogia”: XV Internationali materjalid. keskkonnakaitse - Novosibirsk, 2010. - lk 325.
15. Badmaeva, E.E. Eeterliku õli koostis Artemisia annua / EE. Badmaeva, T.E. Soktoyeva, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // "Keskkonnasõbralikud ja ressursisäästlikud tehnoloogiad": materjalid Vseross. noortekonverents. alates Intern. osalemist. - Ulan-Ude, 2011. -C. 156-157.
16. Soktoeva, T.E. Artemisiniini ekstraheerimine koirohu aastasest Artemisia annua L. / T.E. Soktoeva, G.L. Ryzhov, K.A. Dychko, V.V. Khasanov, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // “Baikali piirkonna arengu prioriteedid ja tunnused”: Vth rahvusvahelise materjali. teaduslik conf. - Ulan-Ude, 2011. - lk 127-128.
17. Zhigzhitzhapova, C.B. Artemisia annua L. / C.B keemiline koostis. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // “Baikali piirkonna ja külgnevate piirkondade taimestik”: materjalid Vserossist. teaduslik conf. - Ulan-Ude, 2011. - lk 152-153.
AAS aatomabsorptsioonspektrofotomeetria
A.S. täiesti kuivad toorained
Bioloogiliselt aktiivsed ained
GZ bioloogilised varud
BH paberkromatograafia
Maailma Terviseorganisatsiooni Maailma Terviseorganisatsioon
HPLC-MS suure jõudlusega vedeliku masskromatograafia
GF riigi farmakopöa
Põhikomponentide ISC meetod
CO-standardproov
need õhekihikromatograafia
EZ tegevuse reservid
SRM Valige reaktsiooni jälgimine
Autor avaldab siirast tänu õppe juhendajale, D.Sc., prof. LD Radnaeva, samuti doktor, dotsent, vanemteadur Venemaa Teaduste Akadeemia Siberi filiaali Baikali loodushoiu instituut Zhigzhitzhapova C.B, keemiaarst, auprofessor Tomski Riiklik Ülikool Ryzhova G.L. abi ja toetuse saamiseks töö ettevalmistamisel.
See kirjutati alla prindi 11/21/2011 Formaat 60x84 1/16. Ofsetpaber. Maht 1,5tk. l Ringlus 100. Tellimuse number 67.
Trükitud kirjastuse trükikotta BNTS SB RAS. 670047 Ulan-Ude, Sakhyanova, 6.
Soktoevi töö sisu, Tuyana Erdemovna :: 2011 :: Ulan-Ude
1. peatükk. LITERATSIOONI LÄBIVAATAMINE
Perekonna Artemisia L. uuringu praegune olukord
1.1. Sivers koirohu ja 12. aastase koirohu botaanilised omadused
1.2. Eeterlikud õlid ja perekonna Wormwood looduslikud asuleentaimed
1.2.1. Eeterlike õlide ja loodusliku asuleeni 14 perekonna Wormwood taime keemiline koostis
1.2.2. Perekonna Wormwood taimede eeterlike õlide kasutamine meditsiinis
1.2. Artemisiniin: avastamine, struktuur ja süntees, füüsikalis-keemilised 31 omadused, antiplasmodium toime mehhanism
1.3. Perekonna Wormwood taimede rasvhapete koostis
1.4. Perekonna Wormwood taimede fenoolsed ühendid
1.5. Perekonna Wormwood taimede elementide koostis 38 JÄRELDUSED PEATÜKKELE
2. PEATÜKK OBJEKTIDE JA MEETODITE OMADUSED 41 TEADUSUURINGUD
2.1. Uuringuobjektid, tooraineproovid - Sivers koirohu rohi ja 41 ürdi ürdi aastas
2.2. Uurimismeetodid
2.2.1. Bioloogiliste uuringute meetodid
2.2.1.1. Anatoomiline ja diagnostiline uuring
2.2.1.2. Ressursside uurimine
2.2.2. 43 bioloogiliselt aktiivse aine kvalitatiivse ja kvantitatiivse määramise meetodid
2.2.3. Merchandising analüüs: meetodid 50 hea kvaliteediga tooraine loomiseks
2.2.4. Statistilise töötlemise meetodid. Põhikomponendi meetod.
3. PEATÜKK. HERBALISETE HERBALIIDI FARMAKOGNOSTIKA ANALÜÜS 53 SILMAD
3.1. Sivers koirohi rohu mikroskoopiline analüüs
3.2. Sibers Wormwoodi varud
3.3. Peamise BAS rohu õde-õed-õed uuring
3.3.1. Komponentide kvalitatiivne ja kvantitatiivne sisaldus 64 Sivers koirohi eeterlik õli
3.3.1.1. Eeterliku õli ja 64 hamazulena kogunemise keemiline koostis ja dünaamika Sivers koirohi rohus Buryatia erinevates piirkondades
3.3.1.2. Eeterliku õli ja kummasuleeni kuhjumise iseärasused 65 Sivers koirohu rohus taime arengu erinevatel etappidel
3.3.1.3. Muru eeterliku õli väikeste komponentide kogunemine 71 Sivers koirohi
3.3.1.4. Omadused eeterliku õli ja kummasiidi kogunemisest rohus 72 Sivers koirohi taime erinevatest osadest
3.3.2. Flavonoidide ja tanniinide kvalitatiivne ja kvantitatiivne sisaldus Sivers koirohi rohus
3.3.3. Sivers koirohi rohu rasvhapete koostis
3.3.4. Maitsetaimede iga-aastane elementide koosseis JÄRELDUSED PEATÜKKELE
4. PEATÜKK. PÕLLUMAJANDUSLIKE PÕLLUMAJANDUSTE FARMAKOGNOSTIKA ANALÜÜS 83 ÜKS AASTA
4.1. Iga-aastase herma koirohi mikroskoopiline analüüs
4.2. Ühekordsed koirohu varud
4.3. Peamise BAS rohu koirohu iga-aastane uuring
4.3.1. Eeterliku õli koostisosade kvalitatiivne ja kvantitatiivne sisaldus ürdikirjas
4.3.1.1. Eeterliku õli keemiline koostis ja dünaamika 92-aastases üheaastase koirohu rohus erinevates kasvukohtades
4.3.1.2. Eeterliku õli kogunemise iseärasused koirohu rohus, iga-aastased erinevates arengufaasides ja tehase erinevates osades
4.3.2. Flavonoidide rohu kvalitatiivne ja kvantitatiivne määramine 100 koirohi aastas
4.3.3. Taimsed koirohupi rasvhapete koostis aastas ® ® *
4.3.4. Aastakujuline ürdikirpsu elementaarne koostis
4.4. Artemisiniini kvantitatiivse määramise meetodi väljatöötamine koirohu 103 rohus HPLC-MS iga-aastase meetodi abil
4.4.1. Artemisiniini kvantitatiivse ekstraheerimise tingimuste valik 103 üheaastasest koirohust
4.4.2. Artemisiniini 104 kvantitatiivse määramise tehnika väljatöötamine HPLC-MS abil
4.4.3. Artemisiniini kvantitatiivne sisaldus iga-aastases koorikus erinevates kasvukohtades
4.4.4. Artemisiniini kvantitatiivse sisalduse analüüs rohus 107 koirohus iga-aastase arengu eri etappidel ja taime eri osades
PEATÜKK 5. NÄITAJATE NÄITAJAD 111 RAUDTEAINETE HEAUS
5.1. Tooraine morfomeetrilised näitajad
5.2. Rohu õdede-vendade standardimine
5.2.1. Merchandising indikaatorid muru Sills koirohi!
5.2.2. Sivers koirohi ürdi standardiseerimine vastavalt 115 hamazulelen'i sisule eeterliku õli koostises
5.2.3. Sivers koirohi rohu säilimisaja kindlaksmääramine
5.3. Ürdi ürdi aastane standardimine ^ ^ ^
5.3.1. Kaupade indikaatorid rohi sagebrush aastane * '^
5.3.2. Artemisiniini sisalduse kohta hinnatakse ürdi ürdi iga-aastast standardimist
5.3.3. Iga-aastase ürdirohu säilivusaeg
Teose "Farmatseutiline keemia, farmakognosia", Soktoeva, Tuyana Erdemovna teooria tutvustus, abstraktne
Teema asjakohasus. Perekonna Artemisia (koirohi) taimed on paljutõotavad bioloogiliselt aktiivsete ainete allikad, nagu tarragon koirohi Artemisia dracunculus L., koirohi Artemisia absinthium L., koirohi Artemisia vulgaris L. kasutatakse laialdaselt rahvamuusikas, traditsioonilises meditsiinis ja toiduainetööstuses. Artemisia annua L., iga-aastane koirohi, tutvustati paljudes riikides edukalt kultuuri ja 2001. aastal soovitas WHO seda kui peamise artemisiniini allikat, mis on malaaria esimese rea ravi. Tänapäeval annavad artemisiniini tootvad riigid umbes veerandi ülemaailmsetest tervisevajadustest [1, 2]. 137-aastastest isoleeriti 137 bioloogiliselt aktiivset ühendit, sealhulgas 40 seskviterpeeni, 10 triterpeeni, 7 kumariini, 46 flavonoidi, mis võivad olla ravimi väljatöötamise aluseks [3]. 20. sajandi kaheksakümnendatel aastatel üritas rühm teadlasi [4] kasvatada NSV Liidu üheaastase taimestiku metsikult kasvavat osa Moskvas. Tänapäeval viiakse Tomski Riiklikus Ülikoolis läbi esimesed aastad. Burjaatia n. On iga-aastane metsikult kasvav liik.
Koos ühe-aastase Burjaatiaga on levinud Sivers koirohi Artemisia sieversiana Willd, mis on ka paljutõotav liik. P. Sievers'i rohus on flavonoide, eeterlikku õli, kumariini [5-8]. Seabera eeterlik õli on huvipakkuv kaamaseeni allikana, mis on mittetoksiline põletikuvastase, bakteritsiidse ja regeneratiivse toimega ühend [9, 10].
Seni ei ole Buryatia iga-aastase taimestiku Siversi koirohi ja koirohi üksikasjalik keemiline uuring läbi viidud paljulubavate bioloogiliselt aktiivsete ainete allikatena, mistõttu nende uuring on kiireloomuline ülesanne.
Eesmärk: Sivers koirohi Artemisia sieversiana Willd'i farmakoloogiline uuring. ja koirohi aastane Artemisia annua L. kui bioloogiliselt aktiivsete ainete väärtuslik allikas.
Selle eesmärgi saavutamiseks on vaja lahendada järgmised ülesanded:
1. Tuvastage Siversi maapealse osa anatoomilised ja diagnostilised omadused lk ja lk. Üks aasta, kehtestage tooraine tooraine näitajad, hinnatakse varusid ja võimalust koguda ühe aasta ja Siverid Burjaatia Vabariigi territooriumil;
2. Uurida nende taimede bioloogiliselt aktiivsete ainete põhirühmade keemilist koostist ja määrata nende kvantitatiivne sisaldus, määrata eeterlike õlide ja artemisiniini lokaliseerimine taime üksikutesse osadesse, uurida nende kogunemise dünaamikat arengufaasides ja määrata optimaalsed kogumise tingimused;
3. Töötada välja meetod artemisiniini kvantitatiivseks määramiseks ühe-aastase õhust osa;
4. Määrake kindlaks põhilised bioloogiliselt aktiivsete ainete sisalduse kvaliteedinäitajad ja -standardid, töötama välja ravimite toormaterjalide regulatiivsed dokumendid - Sivers koirohu rohi ja ühe aasta koirohu rohi.
Teaduslik uudsus. Sivers ja P. aastase rohu peamised diagnostilised tunnused loodi, töötati välja toormaterjalide standardimiseks vajalikud arvnäitajad.
Uuriti Siversi rohu ja ühe-aastase rohu keemilist koostist. Määrati eeterlike õlide, flavonoidide, rasvhapete, makro- ja mikroelementide sisaldus. Flavonoidid - luteoliin-7-glükosiid, rutiin, kvertsetiin ja krüoterool tuvastati HPLC-MS meetodil nendes taimedes. Peamised rasvhapped uuritud koirohuli tüüpides on palmitiinsed, linoolsed, linoleensed, 10% oktadekeenhapet leidub ka olulises koirohus.
Artemisiniini ekstraheerimise tingimused (ekstraheerimisviis, ekstraheerimismeetod, ekstraheerimisaeg) määrati iga-aastastest ürdidest ja tehti kindlaks, et artemisiniini maksimaalne ekstraheerimine saavutatakse ultraheli ja subkriitilise CO2 eraldamisega. HPLC-MS abil on kindlaks tehtud, et ühe aasta vanuses artemisiniini suurim kogus sisaldub õisikutes õitsemise faasis.
Uuriti eeterliku õli kogunemise dünaamikat sõltuvalt arengufaasist ja taimeosast. Suurim kogus kaamaseeni eeterlikku õli p. Siversa koguneb õisikute ja õitsemise faasides.
BAS-i kehtestatud kvaliteedinäitajad sisalduvad regulatiivsetes dokumentides.
Praktiline tähtsus. Siversi asula reservid ja võimalik aastane hankemahu maht ning ühe aasta arveldus Buryatia Vabariigi territooriumil (Siversi asula - 0,1 kuni 73,7 tonni aastas ja üheaastane arveldamine 1,2 kuni 122,3 tonnini aastas).
Artemisiniini kvantitatiivseks määramiseks p. Grassis on välja töötatud iga-aastane HPLC-MS meetod. Artemisiniini kvantitatiivseks määramiseks vajalike toorainete proovide ettevalmistamise tingimused on teaduslikult põhjendatud.
Toorainete standardiseerimine on läbi viidud, välja töötatud FS projektid - “Sivers Wormwood Herbal” ja “Wormwood One-Year Grass”.
Rakendamise aste. Eeterliku õli ja mikroskoopiliste analüüsiandmete väljavõtmise meetodit testiti ja tutvustati Föderaalse Riikliku Kõrghariduse Haridusasutuse Farmaatsiaosakonna haridusprotsessis “Burjaat Riiklik Ülikool” (6. septembri 2011. aasta rakendusakt nr 1). FS-i projektid Sivers'i koirohu ja ühe aasta koirohu puhul valmistatakse ette tasu eest.
Töö aprobatsioon. Töö peamised sätted esitati ja arutati: rahvusvahelisel osalusel toimuv teaduslik-praktiline konverents „Traditsioonilise meditsiini areng Venemaal: kogemused, uuringud, väljavaated” (Ulan-Ude, 2010); 7. Winter Simposium on Chemometrics "Kaasaegsed andmete analüüsimeetodid" (Peterburi, 2010); rahvusvaheline teaduskonverents, mis on pühendatud Buryati Riikliku Ülikooli 15. aastapäevale "Baikali Aasia tegelikud uuringud" (Ulan-Ude, 2010); V rahvusvaheline teadus-praktiline konverents "Baikali piirkonna arengu prioriteedid ja tunnused" (Ulan-Ude, 2011); X rahvusvaheline teadus-praktiline konverents "Lõuna-Siberi ja Mongoolia botaanika probleemid" (Barnaul, 2011); IV Vene-Vene konverents "Uued edusammud taimsete materjalide keemia ja keemilise tehnoloogia valdkonnas" (Barnaul, 2009); XVI rahvusvaheline üliõpilaste, doktorantide ja noorte teadlaste konverents "Lomonosov-2009" (Moskva, 2009); XV Rahvusvaheline Ökoloogiline Üliõpilaste Konverents "Venemaa ja selle lähiümbruse ökoloogia" (Novosibirsk, 2010); II üliõpilaste, kraadiõppurite ja noorte teadlaste kogu-vene teaduslik-praktiline konverents "Keemia-, biotehnoloogia- ja toiduainetööstuse tehnoloogiad ja seadmed" (Biysk, 2009); Vene-vene teaduslik-praktiline konverents "Baikali piirkonna ja külgnevate piirkondade taimestik" (Ulan-Ude, 2011); V Venemaa noorte teadlaste kooliseminar “Piirkonna säästva arengu probleemid” (Ulan-Ude, 2009); piirkondlik noorte teaduslik-praktiline konverents rahvusvahelise osalusega "Keskkonnasõbralikud ja ressursside säästvad tehnoloogiad ja materjalid" (Ulan-Ude, 2010).
Töö viidi läbi uurimisprojektide raames: RFBR: nr 08-04-90202-Monga „Kesk-Aasia bioloogiliselt aktiivsete ühendite biosünteesi biogeneetiliste uuringute uurimine” (2008–2009), nr 08-04-9803 7-rsibirya ja
Taimede keemiline koostis Baikali piirkonna ökosüsteemide seisundi näitajana (2008-2010); interdistsiplinaarne integratsiooniprojekt №93 "Uuringute arendamine meditsiinilise keemia ja farmakoloogia valdkonnas kui teaduslik alus kodumaiste ravimite arendamiseks"; ühisprojekt Mongoolia Teaduste Akadeemiaga "Uute lipo - ja nanosomaalsete ravimivormide saamine looduslike toorainete abil"; RFBR: № 10-03-16001-mobzros “Noorte teadlaste liikuvus” (2010), №11-03-90705-noorte vene teadlaste teadustöö (koolitus) Venemaa Föderatsiooni juhtivates teadusorganisatsioonides 2011 (2011).
Väljaanded. Tulemuste kohaselt avaldati 17 teadustööd, millest 3 avaldati Vene Föderatsiooni Kaitseministeeriumi kõrgema atesteerimiskomisjoni soovitatud perioodikaväljaannetes.
Kaitsele võetakse välja:
• Buryatias kasvava Siversi ja P. anatoomilise struktuuri, varude, autentsuse kriteeriumide uuringu tulemused;
• bioloogiliselt aktiivsete ainete keemilise uuringu tulemused ja nende hooajaline dünaamika;
• Siversi maapealse osa standardimise uuringute tulemused lk ja lk 1 aasta.